1. Klasyfikacja
Elektroforezę żelową dzieli się na typ pionowy (w tym żele kolumnowe i żele w postaci płyt) i typ poziomy (głównie żele w postaci płytek) (Rysunek 6-18). Ogólnie rzecz biorąc, separacja pionowa jest nieco lepsza od poziomej, ale poziome przygotowanie żelu ma co najmniej cztery zalety: pod całym żelem znajduje się podparcie, co pozwala na użycie agarozy o niskim stężeniu; możliwe jest przygotowanie płytek z żelem agarozowym o różnych specyfikacjach; przygotowanie żelu i ładowanie próbki są wygodniejsze; komora elektroforetyczna jest łatwa w budowie i opłacalna. Ponieważ elektroforezę poziomą przeprowadza się, gdy płytka z żelem agarozowym jest całkowicie zanurzona około 1 mm pod powierzchnią buforu do elektroforezy, nazywa się ją również elektroforezą zanurzoną.
Zbiornik do elektroforezy DYCP-31DN do elektroforezy w żelu agarozowym
2. System buforowy
W separacji kwasów nukleinowych większość systemów przyjmuje systemy ciągłe. Powszechnie stosowane bufory do elektroforezy obejmują bufor TBE (0,08mol/L Tris·HCl, pH 8,5, 0,08mol/L kwas borowy, 0,0024mol/L EDTA) i THE (0,04mol/L Tris·HCl, pH 7,8, 0,02mol/L octan sodu, 0,0018mol/L EDTA). Bufory te są na ogół przygotowywane jako 10-krotne roztwory podstawowe i rozcieńczane do wymaganego stężenia podczas użycia. Szybkość migracji liniowego i kolistego DNA w żelu agarozowym różni się w zależności od użytego buforu. W buforze THE szybkość migracji liniowego DNA jest większa niż kolistego DNA, natomiast w buforze TBE jest odwrotnie.
3. Przygotowanie żelu agarozowego
(1) Przygotowanie poziomego żelu agarozowego
(a) Przygotować wymagane stężenie żelu agarozowego przy użyciu 1x buforu do elektroforezy.
(b) Ogrzać agarozę do całkowitego rozpuszczenia we wrzącej łaźni wodnej, na mieszadle magnetycznym lub w kuchence mikrofalowej. Ochłodzić roztwór agarozy do 55°C i dodać bromek etydyny (EB) barwnik do końcowego stężenia 0,5 µg/ml.
(c) Uszczelnij krawędzie płytek szklanych lub akrylowych niewielką ilością żelu agarozowego, dodaj grzebień i umieść zęby grzebienia około 0,5 ~ 1,0 mm nad płytką.
(d) Wlać w sposób ciągły roztopiony roztwór żelu agarozowego do formy szklanej lub akrylowej (grubość zależy od objętości próbki DNA), unikając wprowadzenia pęcherzyków powietrza. Pozwól mu naturalnie zestalić się w temperaturze pokojowej.
(e) Ostrożnie usuń grzebień po całkowitym zestaleniu. Dodaj odpowiednią ilość buforu do elektroforezy do zbiornika żelu, upewniając się, że płytka żelowa jest zanurzona około 1 mm pod powierzchnią buforu do elektroforezy.
(2) Przygotowanie pionowego żelu agarozowego
(a) Usunąć tłuszcz lub pozostałości z płytek szklanych, przemywając je etanolem.
(b) Umieść płytki dystansowe pomiędzy przednią i tylną zaporą, wyrównaj krawędzie płytek dystansowych z przednią i tylną zaporą i zabezpiecz je zaciskami.
(c) Dodać 2% agarozy w 1x buforze pomiędzy krawędzie płytek dystansowych, aby utworzyć czop agarozowy o wysokości 1 cm na dnie komory do odlewania żelu.
(d) Wlać stopiony żel agarozowy o pożądanym stężeniu, przygotowany w 1x buforze, do komory żelowej do 1 cm poniżej górnej części.
(e) Włóż grzebień, unikając zatrzymania pęcherzyków powietrza pod zębami grzebienia. Czasami podczas schładzania żelu agarozowego na zębach grzebienia mogą pojawić się zmarszczki; w takich przypadkach po prostu dodaj trochę roztopionej agarozy na wierzch, aby ją zestalić.
(f) Usuń grzebień. Aby zapobiec wyciekaniu buforu w szczelinie ładującej, uszczelnij połączenie pomiędzy płytką żelu agarozowego a komorą elektroforezy 2% agarozą i dodaj wymaganą ilość buforu.
(g) Dodać 1x bufor do elektroforezy do komory żelowej.
(h) Ostrożnie nałóż próbki DNA na żel agarozowy pod buforem.
Więcej informacji na temat podstawowej wiedzy na temat elektroforezy w żelu agarozowym przekażemy w przyszłym tygodniu. Chciałbym, żeby te informacje były pomocne w Twoim eksperymencie.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specjalizuje się w produkcji instrumentów do elektroforezy od ponad 50 lat, dysponując własnym profesjonalnym zespołem technicznym i centrum badawczo-rozwojowym. Posiadamy niezawodną i kompletną linię produkcyjną od projektu po kontrolę, wsparcie magazynowe i marketingowe. Naszymi głównymi produktami są ogniwa do elektroforezy (zbiornik/komora), zasilacz do elektroforezy, transiluminator z niebieską diodą LED, transiluminator UV, system obrazu i analizy żelu itp.
Obecnie poszukujemy partnerów, mile widziani są zarówno zbiorniki do elektroforezy OEM, jak i dystrybutorzy.
Jeśli masz plan zakupów naszych produktów, nie wahaj się z nami skontaktować. Możesz wysłać nam wiadomość na e-mail[e-mail chroniony]Lub[e-mail chroniony]lub zadzwoń do nas pod numer +86 15810650221 lub dodaj Whatsapp +86 15810650221 lub Wechat: 15810650221.
Zeskanuj kod QR, aby dodać go na Whatsapp lub WeChat.
Czas publikacji: 7 grudnia 2023 r