Przygotowanie próbek iZaładunek
Ze względu na zastosowanie w większości przypadków ciągłego układu buforowego bez żelu układającego, próbki powinny charakteryzować się odpowiednim stężeniem i małą objętością. Użyjpipetapowoli dodawać próbkę, w ilości 5–10 μg na dołek, aby uniknąć znacznego spadku rozdzielczości. Gdyładowanie próbki, należy wyłączyć zasilanie. Próbka powinna zawierać barwnik wskaźnikowy (0,025% błękitu bromofenolowego lub pomarańczowego) i sacharozę (10-15%) lub glicerol (5-10%) w celu zwiększenia jej gęstości, zagęszczenia próbki i zapobiegania dyfuzji. Czasami jednak sacharoza lub glicerol mogą powodować powstawanie pasków w kształcie litery U na wynikach elektroforezy, czego można uniknąć stosując 2,5% Ficoll (poliwinylopirolidon).
Elektroforeza
Napięcie elektroforezy wynosi 5-15 V/cm, zazwyczaj około 10 V/cm. W przypadku separacji dużych cząsteczek napięcie powinno być niższe, zwykle nie przekraczające 5 V/cm.
Barwiący
Do barwienia w celu obserwacji prążków DNA w żelu agarozowym powszechnie stosuje się barwnik fluorescencyjny, bromek etydyny (EB). EB może wstawiać się pomiędzy parami zasad cząsteczek DNA, powodując wiązanie EB z DNA. Absorpcja światła ultrafioletowego 260 nm przez DNA jest przenoszona na EB, a związany EB emituje fluorescencję przy 590 nm w czerwono-pomarańczowym obszarze widma światła widzialnego. Barwienie żelu w roztworze MgSO4 o stężeniu 1 mmol/l przez 1 godzinę może zmniejszyć fluorescencję tła spowodowaną niezwiązanym EB, ułatwiając wykrywanie małych ilości DNA.
Barwnik EB ma kilka zalet: jest łatwy w użyciu, nie rozbija kwasów nukleinowych, ma wysoką czułość i może barwić zarówno DNA, jak i RNA. EB można dodać do próbki i śledzić w dowolnym momencie za pomocą absorpcji UV. Po zabarwieniu EB można usunąć poprzez ekstrakcję n-butanolem.
Jednakże barwnik EB jest silnym mutagenem i podczas obchodzenia się z nim należy zachować środki ostrożności, takie jak noszenie rękawic polietylenowych. Oranż akrydynowy jest również powszechnie stosowanym barwnikiem, ponieważ pozwala na rozróżnienie jednoniciowych i dwuniciowych kwasów nukleinowych (DNA, RNA). Wykazuje zieloną fluorescencję (530 nm) dla dwuniciowych kwasów nukleinowych i czerwoną fluorescencję (640 nm) dla jednoniciowych kwasów nukleinowych. Dodatkowo do barwienia można zastosować inne barwniki, takie jak błękit metylenowy, zieleń metylenowa i chinolina B.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specjalizuje się w produkcji instrumentów do elektroforezy od ponad 50 lat, dysponując własnym profesjonalnym zespołem technicznym i centrum badawczo-rozwojowym. Posiadamy niezawodną i kompletną linię produkcyjną od projektu po kontrolę, wsparcie magazynowe i marketingowe. Naszymi głównymi produktami są ogniwa do elektroforezy (zbiornik/komora), zasilacz do elektroforezy, transiluminator z niebieską diodą LED, transiluminator UV, system obrazu i analizy żelu itp.
Obecnie poszukujemy partnerów, mile widziani są zarówno zbiorniki do elektroforezy OEM, jak i dystrybutorzy.
Jeśli masz plan zakupów naszych produktów, nie wahaj się z nami skontaktować. Możesz wysłać nam wiadomość na e-mail[e-mail chroniony]Lub[e-mail chroniony]lub zadzwoń do nas pod numer +86 15810650221 lub dodaj Whatsapp +86 15810650221 lub Wechat: 15810650221.
Zeskanuj kod QR, aby dodać go na Whatsapp lub WeChat.
Czas publikacji: 20 grudnia 2023 r