Test kometowy (elektroforeza w żelu jednokomórkowym, SCGE) to czuła i szybka technika stosowana przede wszystkim do wykrywania uszkodzeń DNA i naprawy w poszczególnych komórkach. Nazwa „Comet Assay” wzięła się od charakterystycznego, przypominającego kometę kształtu, który pojawia się w wynikach: jądro komórki tworzy „głowę”, natomiast uszkodzone fragmenty DNA migrują, tworząc „ogon” przypominający kometę.
Zasada
Zasada testu kometowego opiera się na migracji fragmentów DNA w polu elektrycznym. Nienaruszone DNA pozostaje w jądrze komórkowym, podczas gdy uszkodzone lub pofragmentowane DNA migruje w kierunku anody, tworząc „ogon” komety. Długość i intensywność ogona są wprost proporcjonalne do stopnia uszkodzenia DNA.
Procedura
- Przygotowanie komórek: Badane komórki miesza się z agarozą o niskiej temperaturze topnienia i rozprowadza na szkiełkach mikroskopowych w celu utworzenia jednolitej warstwy.
- Liza komórek: Szkiełka zanurza się w roztworze lizującym w celu usunięcia błony komórkowej i błony jądrowej, odsłaniając DNA.
- Elektroforeza: Szkiełka umieszcza się w komorze do elektroforezy w warunkach zasadowych lub obojętnych. Uszkodzone fragmenty DNA migrują w kierunku elektrody dodatniej pod wpływem pola elektrycznego.
- Barwiący: Po elektroforezie szkiełka barwi się barwnikiem fluorescencyjnym (np. bromkiem etydyny) w celu uwidocznienia DNA.
- Analiza mikroskopowa: Przy użyciu mikroskopu fluorescencyjnego lub specjalistycznego oprogramowania analizowane są kształty komet i mierzone parametry, takie jak długość i intensywność ogona.
Zdjęcie z biorendera
Analiza danych
Wyniki testu kometowego ocenia się na podstawie kilku kluczowych parametrów:
- Długość ogona: Reprezentuje odległość, na jaką migruje DNA, wskazując stopień uszkodzenia DNA.
- Zawartość DNA ogona: Procent DNA, który migruje do ogona, często stosowany jako ilościowa miara uszkodzenia DNA.
- Moment Oliwnego Ogona (OTM): Łączy długość ogona i zawartość DNA ogona, aby zapewnić bardziej kompleksową miarę uszkodzeń DNA.
Aplikacje
- Badania genotoksyczności: Test kometowy jest szeroko stosowany do oceny wpływu chemikaliów, leków i promieniowania na DNA komórek, co czyni go kluczowym narzędziem do badania genotoksyczności.
- Toksykologia środowiskowa: Pomaga w analizie wpływu zanieczyszczeń środowiska na DNA organizmów, zapewniając wgląd w bezpieczeństwo ekosystemu.
- Badania medyczne i kliniczne: Test kometowy służy do badania mechanizmów naprawy DNA, nowotworów i innych chorób związanych z DNA. Ocenia także wpływ terapii przeciwnowotworowych, takich jak radioterapia i chemioterapia, na DNA.
- Nauk o Żywności i Rolnictwie: Stosowany do oceny bezpieczeństwa pestycydów, dodatków do żywności i innych substancji oraz do badania ich toksycznego działania na modelach zwierzęcych.
Zalety
- Wysoka czułość: Zdolny do wykrywania niskich poziomów uszkodzeń DNA.
- Prosta obsługa: Technika jest prosta, dzięki czemu nadaje się do wysokowydajnych badań przesiewowych.
- Szerokie zastosowanie: Można go stosować do różnych typów komórek, w tym komórek zwierzęcych i roślinnych.
- Wyzwania kwantyfikacyjne: Dostarczając danych jakościowych na temat uszkodzeń DNA, analiza ilościowa w dużym stopniu opiera się na oprogramowaniu i technikach analizy obrazu.
- Warunki eksperymentalne: Na wyniki mogą wpływać takie czynniki, jak czas elektroforezy i pH, co wymaga starannej kontroli warunków eksperymentalnych.
Ograniczenia
Test kometowy jest nieocenionym narzędziem w badaniach biomedycznych, naukach o środowisku i opracowywaniu leków ze względu na jego elastyczność i wysoką czułość w wykrywaniu uszkodzeń i naprawy DNA. Pekin Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Biotechnologia Liuyi)oferuje poziomą komorę elektroforetyczną do testów kometowych. Zapraszamy do kontaktu z nami w celu omówienia ntPróba kometyprotokół.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specjalizuje się w produkcji instrumentów do elektroforezy od ponad 50 lat, dysponując własnym profesjonalnym zespołem technicznym i centrum badawczo-rozwojowym. Posiadamy niezawodną i kompletną linię produkcyjną od projektu po kontrolę, wsparcie magazynowe i marketingowe. Naszymi głównymi produktami są ogniwa do elektroforezy (zbiornik/komora), zasilacz do elektroforezy, transiluminator z niebieską diodą LED, transiluminator UV, system obrazowania i analizy żelu itp. Dostarczamy również instrumenty laboratoryjne, takie jak przyrząd do PCR, mieszalnik wirowy i wirówka do laboratorium.
Jeśli masz plan zakupów naszych produktów, nie wahaj się z nami skontaktować. Możesz wysłać nam wiadomość na e-mail[e-mail chroniony]Lub[e-mail chroniony]lub zadzwoń do nas pod numer +86 15810650221 lub dodaj Whatsapp +86 15810650221 lub Wechat: 15810650221.
Zeskanuj kod QR, aby dodać go na Whatsapp lub WeChat.
Czas publikacji: 20 września 2024 r