Zasada
Elektroforeza błony octanu celulozy jest metodą elektroforezy wykorzystującą błonę octanu celulozy jako nośnik. Zjawisko, w którym naładowane cząstki przemieszczają się w stronę przeciwnej elektrody pod działaniem pola elektrycznego, nazywa się elektroforezą. Ponieważ każde białko ma określony punkt izoelektryczny, jeśli białko zostanie umieszczone w roztworze o pH niższym niż jego punkt izoelektryczny, białko zostanie naładowane dodatnio i przesunie się w stronę elektrody ujemnej. Wręcz przeciwnie, przesuwa się w stronę bieguna dodatniego. Ponieważ prędkość cząsteczek białek poruszających się w polu elektrycznym jest związana z ich ładunkiem, kształtem i rozmiarem cząsteczek, różne białka można rozdzielać za pomocą elektroforezy. Surowica zawiera różnorodne białka, z których wszystkie mają punkt izoelektryczny przy pH 7,5 lub niższym. Kiedy surowicę umieszcza się w buforze o pH 8,6 w celu przeprowadzenia elektroforezy, wszystkie białka surowicy są naładowane ujemnie i będą przemieszczać się w polu elektrycznym w stronę dodatnią. Ponieważ różne białka surowicy mają różne ładunki przy tym samym pH, cząsteczki molekularne mają różną wielkość, a zatem prędkość migracji jest różna i są one rozdzielane za pomocą elektroforezy. Punkty izoelektryczne i masy cząsteczkowe białek surowicy przedstawiono w poniższej tabeli:
| Białko | Punkty izoelektryczne (PI) | Masa cząsteczkowa |
| Albumina | 4,88 | 69 000 |
| α1-gloulina | 5.00 | 200 000 |
| α2-gloulina | 5.06 | 300 000 |
| β-gloulina | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-gloulina | 6,85 ~ 7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Doświadczenie polega na oddzieleniu różnych białek w surowicy krwi za pomocą membrany z octanu celulozy (w skrócie CAM) jako nośnika. CAM to rodzaj pianek toaletowychefolia o dobrym jednolitym kolorze i grubości 0,1 mm-1,5 mm, która charakteryzuje się pewną absorpcją wody.
Materiały, przyrządy i odczynniki do elektroforezy CAM
Próbki:zdrowa ludzka surowica krwi
Instrument:zasilacz DYY-6C, zbiornik do elektroforezy DYCP-38C, doskonałe ładowanie próbek WD-9404
Odczynniki
1) membrana z octanu celulozy 7X9cm
2) Roztwór buforowy barbitolu o pH 8,6 (siła jonowa 0,05-0,09, czas 0,06 tid): weź 1,84 g kwasu dietylobarbiturowego, a następnie weź 1,03 g pentobarbitalu dietylu sodowego, dodaj trochę wody destylowanej, ogrzej do rozpuszczenia i wymieszaj do 1000ml ;
3) Plama: Ponceau S 0,2 g, trójchlorooctowy 3 g, dodać 100 ml wody destylowanej;
4) TBS/T lub PBS/T: 45 ml 95% etanolu, 5 ml lodowatego kwasu octowego, dodać 50 ml wody destylowanej;
5) Roztwór czyszczący: 70 ml bezwodnego etanolu, 30 ml lodowatego kwasu octowego.
Metoda eksperymentud
1) Przygotuj membranę: Zanurz membranę w roztworze buforu barbitolu na 30min-8h, wyjmij ją, usuń nadmiar roztworu za pomocą bibuły.
2) Ładowanie próbek: Rozróżnij szorstką i gładką stronę membrany i zaznacz linię w odległości 1,5 cm od górnego końca po szorstkiej stronie. Załaduj próbki za pomocą doskonałego narzędzia do ładowania próbek po szorstkiej stronie. Uwaga: Próbki należy nakładać na szorstką stronę membrany. Po całkowitym wniknięciu próbek surowicy w membranę należy odwrócić membranę, przyłożyć szorstką stronę (z próbkami) do zbiornika, a koniec z próbkami umieścić w elektrodzie ujemnej.
3) Elektroforeza: Włącz zasilanie, 0,4～Membrana 0,6 m A/cm, czas działania 30-45 min. Po przeprowadzeniu elektroforezy wyłączyć zasilanie.
4) Zabrudzić i oczyścić: Wyjąć membranę ze zbiornika i zanurzyćit do roztworu barwnika na 5 minut, a następnie czyścić w roztworze czyszczącym 3-4 razy, aż kolor tła będzie wyraźny. Białka surowicy powinny być pokazane na prążkach. Zwykle jest pięć stref od górnego końca zaznaczonej linii: albumina, α1-gloulina, α2-gloulina, β-gloulina, γ-gloulina.
5) Konserwacja: poddać suchej elektroforeziezespółw roztworze czyszczącym na 10-15 minut, następnie wyjmij i przyklej na czystą szybę, po wyschnięciu stanie się przezroczystą foliązespół.
EksperymentWynik
Efekt separacji próbek surowicy jest dobry i nie występuje zjawisko ogonowania pasm. Powtarzalność wyników jest różna w zależności od procedur testowych i metod eksperymentatora, a powtarzalność jest wysoka.
Wniosek
System szybkiej detekcji klinicznej elektroforezy (Zbiornik do elektroforezyDYCP-38C,zasilanieDYY-6C i doskonałe ładowanie próbek WD-9404) wyprodukowane przez naszą firmęfirma Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdspełnia wymagania eksperymentalne,Iwyniki są powtarzalne, proste i szybkie, odpowiednie dlanauczaniebadania.
Pekin LiuyiBiotechnology Co., Ltd specjalizuje się w wytwarzaniu produktów do elektroforezy dla przemysłu life science, któryma ponad 50-letnią historię w Chinach, a firma może dostarczać stabilne produkty wysokiej jakości na całym świecie. Przez lata rozwoju jest godny Twojego wyboru!
Obecnie poszukujemy partnerów, mile widziani są zarówno zbiorniki do elektroforezy OEM, jak i dystrybutorzy.
Aby uzyskać więcej informacji o nas, prosimy o kontakt e-mailowy[e-mail chroniony]Lub[e-mail chroniony].
Czas publikacji: 14 listopada 2022 r