Wstęp
Elektroforeza żelowa jest podstawową techniką w biologii molekularnej, szeroko stosowaną do rozdzielania białek, kwasów nukleinowych i innych makrocząsteczek. Właściwa kontrola objętości próbki, napięcia i czasu elektroforezy ma kluczowe znaczenie dla uzyskania dokładnych i powtarzalnych wyników.Nasz kolega z laboratorium oferujenajlepsze praktyki zarządzania tymi parametrami podczas elektroforezy żelowej SDS-PAGE.
Produkty do elektroforezy żelowej Beijing Liuyi Biotechnology
Objętość próbki: zapewnienie spójności
Podczas wykonywania elektroforezy SDS-PAGE objętość próbki jest kluczowym czynnikiem, który może znacząco wpłynąć na rozdzielczość wyników. Ogólnie zaleca się załadowanie 10 µl całkowitego białka na dołek. Aby zapewnić spójność i zapobiec dyfuzji próbki pomiędzy sąsiednimi dołkami, ważne jest, aby do wszystkich pustych dołków dodać równą objętość 1x buforu ładującego. Ten środek ostrożności pomaga zapobiec rozprzestrzenianiu się próbek na sąsiednie ścieżki, co może mieć miejsce, jeśli studzienka pozostanie pusta.
Przed załadowaniem próbek zawsze zaczynaj od dodania znacznika masy cząsteczkowej do jednego dołka. Pozwala to na łatwą identyfikację wielkości białek po elektroforezie.
Kontrola napięcia: równoważenie prędkości i rozdzielczości
Napięcie przyłożone podczas elektroforezy bezpośrednio wpływa zarówno na prędkość migracji próbek przez żel, jak i na rozdzielczość rozdziału. W przypadku SDS-PAGE zaleca się rozpoczęcie od niskiego napięcia około 80 V. To początkowe niskie napięcie pozwala próbkom na powolną i równomierną migrację, koncentrując je w ostrym paśmie, gdy wchodzą do żelu oddzielającego.
Gdy próbki całkowicie wejdą do żelu rozdzielającego, napięcie można zwiększyć do 120 V. To wyższe napięcie przyspiesza migrację, zapewniając skuteczne rozdzielenie białek zgodnie z ich masą cząsteczkową. Niezbędne jest monitorowanie postępu frontu barwnika błękitu bromofenolowego, który wskazuje na zakończenie elektroforezy. W przypadku żeli o stężeniu 10-12% zazwyczaj wystarcza 80-90 minut; jednakże w przypadku żeli 15% może zaistnieć potrzeba nieznacznego wydłużenia czasu działania.
Zarządzanie czasem: wiedzieć, kiedy przestać
Czas jest kolejnym krytycznym czynnikiem w elektroforezie żelowej. Używanie żelu przez zbyt długi lub zbyt krótki czas może prowadzić do nieoptymalnej separacji. Migracja błękitu bromofenolowego jest użytecznym wskaźnikiem: gdy dotrze on do dna żelu, zwykle oznacza to, że należy przerwać proces. W przypadku standardowych żeli, takich jak 10-12%, zazwyczaj odpowiedni jest czas trwania elektroforezy około 80-90 minut. W przypadku żeli o wyższej zawartości procentowej, np. 15%, czas działania należy wydłużyć, aby zapewnić całkowite oddzielenie białek.
Zarządzanie buforami: ponowne wykorzystanie i przygotowanie buforów
Bufor do elektroforezy można użyć ponownie 1-2 razy, w zależności od specyficznych warunków panujących w laboratorium. Jednak dla uzyskania optymalnych rezultatów zaleca się przygotowanie świeżego buforu 10x i rozcieńczenie go tuż przed użyciem. Zapewnia to zachowanie skuteczności buforu, co prowadzi do bardziej wiarygodnych wyników elektroforezy.
Produkty do elektroforezy żelowej Beijing Liuyi Biotechnology
Uważnie kontrolując objętość próbki, napięcie i czas elektroforezy, można znacznie poprawić dokładność i powtarzalność wyników elektroforezy żelowej. Wdrożenie tych najlepszych praktyk w pracy laboratoryjnej pomoże uzyskać wyraźniejsze i wyraźniejsze pasma, co doprowadzi do uzyskania lepszych danych do dalszej analizy.
Jeśli masz więcej dobrych metod optymalizacji eksperymentu elektroforezy żelowej, zapraszamy do dyskusji z nami!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) specjalizuje się w produkcji instrumentów do elektroforezy od ponad 50 lat, dysponując własnym profesjonalnym zespołem technicznym i centrum badawczo-rozwojowym. Posiadamy niezawodną i kompletną linię produkcyjną od projektu po kontrolę, wsparcie magazynowe i marketingowe. Naszymi głównymi produktami są ogniwa do elektroforezy (zbiornik/komora), zasilacz do elektroforezy, transiluminator z niebieską diodą LED, transiluminator UV, system obrazowania i analizy żelu itp. Dostarczamy również instrumenty laboratoryjne, takie jak przyrząd do PCR, mieszalnik wirowy i wirówka do laboratorium.
Jeśli masz plan zakupów naszych produktów, nie wahaj się z nami skontaktować. Możesz wysłać nam wiadomość na e-mail[e-mail chroniony]Lub[e-mail chroniony]lub zadzwoń do nas pod numer +86 15810650221 lub dodaj Whatsapp +86 15810650221 lub Wechat: 15810650221.
Zeskanuj kod QR, aby dodać go na Whatsapp lub WeChat.
Czas publikacji: 20 sierpnia 2024 r