Elektroforeza żelowa jest jedną z głównych metod stosowanych w biologii molekularnej do analizy DNA. Metoda ta polega na migracji fragmentów DNA przez żel, gdzie są one rozdzielane na podstawie rozmiaru lub kształtu. Czy jednak kiedykolwiek napotkałeś jakiekolwiek błędy podczas eksperymentów z elektroforezą, takie jak rozmazane prążki na żelu agarozowym lub brak prążków na żelu? Jaka może być przyczyna tych błędów?
Nasi technicy podsumowali tutaj kilka sposobów rozwiązywania problemów w celach informacyjnych.
1. Rozsmarowane paski na żelu agarozowym
●DNA uległo degradacji. Unikaj zanieczyszczenia nukleazami.
● Bufor do elektroforezy nie jest świeży. Po wielokrotnym użyciu buforu do elektroforezy siła jonowa maleje, a wartość pH wzrasta, przez co pojemność bufora ulega osłabieniu, co wpływa na efekt elektroforezy. Zaleca się częstą wymianę buforu do elektroforezy.
● Zastosowano niewłaściwe warunki elektroforezy. Nie dopuszczać, aby napięcie przekroczyło 20 V/cm i podczas elektroforezy utrzymywać temperaturę <30°C. W przypadku elektroforezy gigantycznej nici DNA temperatura powinna wynosić <15° C. Sprawdź, czy bufor do elektroforezy ma wystarczającą pojemność buforową.
● Na żel nałożono zbyt dużo DNA. Zmniejsz ilość DNA.
● Za dużo soli w DNA. Aby usunąć nadmiar soli, należy zastosować wytrącanie etanolem.
● DNA zostało zanieczyszczone białkiem. Stosuj ekstrakcje fenolowe, aby usunąć białko w zaawansowanym stadium.
● DNA zostało zdenaturowane. Nie podgrzewać przed elektroforezą. Rozcieńczyć DNA w buforze z 20 mM NaCl.
2. Anomalie migracji prążków DNA
● Renaturacja miejsca COS fragmentu λHind III. Przed elektroforezą podgrzewaj DNA przez 5 minut w temperaturze 65°C, a następnie schładzaj je w urządzeniu z lodem przez 5 minut.
● Zastosowano niewłaściwe warunki elektroforezy. Nie dopuszczać, aby napięcie przekroczyło 20 V/cm i podczas elektroforezy utrzymywać temperaturę <30°C. Sprawdź, czy bufor do elektroforezy ma wystarczającą pojemność.
● DNA zostało zdenaturowane. Nie podgrzewać przed elektroforezą. Rozcieńczyć DNA w buforze z 20 mM NaCl.
3. Słabe lub żadne prążki DNA na żelu agarozowym
● Na żelu załadowano niewystarczającą ilość lub stężenie DNA. Zwiększ ilość DNA. Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym jest nieco bardziej czuła niż elektroforeza w agarozie, a obciążenie próbki można odpowiednio zmniejszyć.
● DNA uległo degradacji. Unikaj zanieczyszczenia nukleazami.
● DNA poddano elektroforezie na żelu. Elektroforyzuj żel krócej, użyj niższego napięcia lub użyj żelu o wyższej zawartości procentowej.
● Do wizualizacji DNA wybarwionego bromkiem etydyny użyto źródła światła o niewłaściwej mocy. Aby uzyskać większą czułość, użyj światła W o krótkiej długości fali (254 nm).
4. Brak prążków DNA
●DNA o małych rozmiarach poddano elektroforezie na żelu. Elektroforyzuj żel krócej, użyj niższego napięcia lub użyj żelu o wyższej zawartości procentowej.
● Trudne do rozróżnienia prążków DNA o podobnych cząsteczkach. Zwiększ czas elektroforezy i sprawdź stężenieżelu, aby upewnić się, że procent żelu zostanie wykorzystany w prawidłowy sposób.
● DNA zostało zdenaturowane. Nie podgrzewać przed elektroforezą. Rozcieńczyć DNA w buforze z 20 mM NaCl.
● Nici DNA są ogromne i konwencjonalna elektroforeza żelowa nie jest odpowiednia. Analiza impulsowej elektroforezy żelowej.Jakie inne problemy miałeś podczas elektroforezy w żelu agarozowym? W przyszłości poszukamy więcej informacji na temat przewodników.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) to wyspecjalizowana firma skupiająca się na produktach związanych z elektroforezą w Chinach. Jej historia zaczyna się w 1970 r., kiedy Chiny nie weszły jeszcze w czas reform i otwarcia. Przez lata rozwoju, Liuyi Bitotech posiada własną markę, która jest znana jako marka Liuyi na krajowym rynku produktów do elektroforezy.
Marka Liuyi ma ponad 50-letnią historię w Chinach, a firma może dostarczać stabilne i wysokiej jakości produkty na całym świecie. Dzięki wieloletniemu rozwojowi jest godny Twojego wyboru!
Poziome ogniwa do elektroforezy (zbiorniki/komory) firmy Liuyi Biotech charakteryzują się wysoką jakością i dobrym wyglądem. Dzięki różnym rozmiarom tacek żelowych mogą one spełniać różne wymagania eksperymentalne. Posiadamy własny zespół techniczny i fabrykę. Od projektu po produkcję, od surowców po kluczowe części, możemy kontrolować cały proces. Seria DYCP 31 przeznaczona jest do elektroforezy DNA, które stanowią modelDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, IDYCP-31E. Różnice między nimi to wielkość żeli i cena. Naszym klientom zapewniamy pełną rozmiarówkę produktów. ModelDYCP-32Cmoże wyprodukować największy żel 250 mm * 250 mm.
Tymczasem polecamy nasz zasilacz do elektroforezyDYY-6C,DYY-6DIDYY-10Cdo naszych ogniw do elektroforezy (zbiorniki/komory) serii DYCP-31 i 32.
Jeśli chcesz uzyskać więcej informacji na temat produktów, odwiedź tę witrynę, aby uzyskać więcej. Zachęcamy do skontaktowania się z nami za pośrednictwem poczty elektronicznej, aby poinformować nas, czego chcesz i sprawdzić, czy możemy zapewnić Ci rozwiązania.
Aby uzyskać więcej informacji o nas, prosimy o kontakt e-mailowy[e-mail chroniony], [e-mail chroniony].
Czas publikacji: 9 maja 2022 r