Elektroforeza w żelu poliakrylamidowym
Elektroforeza żelowa jest podstawową techniką stosowaną w laboratoriach różnych dyscyplin biologicznych, umożliwiającą separację makrocząsteczek, takich jak DNA, RNA i białka.Różne media i mechanizmy separacji umożliwiają skuteczniejszą separację podzbiorów tych cząsteczek poprzez wykorzystanie ich właściwości fizycznych.W szczególności w przypadku białek często preferowaną techniką jest elektroforeza w żelu poliakryloamidowym (PAGE).
PAGE to technika rozdzielania makrocząsteczek, takich jak białka, w oparciu o ich ruchliwość elektroforetyczną, czyli zdolność analitów do przemieszczania się w kierunku elektrody o przeciwnym ładunku.W PAGE określa się to na podstawie ładunku, rozmiaru (masy cząsteczkowej) i kształtu cząsteczki.Anality przedostają się przez pory utworzone w żelu poliakryloamidowym.W przeciwieństwie do DNA i RNA, białka różnią się ładunkiem w zależności od zawartych w nich aminokwasów, co może wpływać na ich działanie.Struny aminokwasów mogą również tworzyć struktury drugorzędowe, które wpływają na ich pozorną wielkość, a w konsekwencji na zdolność przemieszczania się przez pory.Dlatego czasami może być pożądana denaturacja białek przed elektroforezą w celu ich linearyzacji, jeśli wymagane jest dokładniejsze oszacowanie wielkości.
STRONA SDS
Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym z siarczanem sodu i dodecylem jest techniką stosowaną do rozdzielania cząsteczek białek o masach od 5 do 250 kDa.Białka rozdziela się wyłącznie na podstawie ich masy cząsteczkowej.Podczas przygotowywania żeli dodaje się dodecylosiarczan sodu, anionowy środek powierzchniowo czynny, który maskuje wewnętrzne ładunki próbek białek i nadaje im podobny stosunek ładunku do masy.Krótko mówiąc, denaturuje białka i nadaje im ładunek ujemny.
Strona natywna
Natywna PAGE to technika wykorzystująca niedenaturowane żele do separacji białek.W przeciwieństwie do SDS PAGE, do przygotowania żeli nie dodaje się środka denaturującego.W rezultacie rozdział białek odbywa się na podstawie ładunku i wielkości białek.W tej technice konformacja, fałdowanie i łańcuchy aminokwasowe białek są czynnikami, od których zależy separacja.Białka nie ulegają w tym procesie uszkodzeniu i można je odzyskać po zakończeniu rozdziału.
Jak działa elektroforeza w żelu poliakryloamidowym (PAGE)?
Podstawową zasadą PAGE jest rozdzielanie analitów poprzez przepuszczanie ich przez pory żelu poliakryloamidowego za pomocą prądu elektrycznego.Aby to osiągnąć, mieszaninę akryloamidu i bisakryloamidu poddaje się polimeryzacji (poliakryloamid) przez dodanie nadsiarczanu amonu (APS).Reakcja katalizowana przez tetrametyloetylenodiaminę (TEMED) tworzy strukturę siatkową z porami, przez które mogą przemieszczać się anality (Rysunek 2).Im wyższy procent całkowitego akryloamidu zawartego w żelu, tym mniejsza wielkość porów, a tym samym mniejsza ilość białek, które będą mogły przejść.Stosunek akryloamidu do bisakryloamidu również będzie miał wpływ na wielkość porów, ale często pozostaje on stały.Mniejsze rozmiary porów zmniejszają również prędkość, z jaką małe białka są w stanie poruszać się w żelu, poprawiając ich rozdzielczość i zapobiegając ich szybkiemu spływaniu do buforu po przyłożeniu prądu.
Sprzęt do elektroforezy w żelu poliakrylamidowym
Cela do elektroforezy żelowej (zbiornik/komora)
Zbiornik na żel do elektroforezy w żelu poliakryloamidowym (PAGE) różni się od zbiornika na żel agarozowy.Zbiornik z żelem agarozowym jest ustawiony poziomo, natomiast zbiornik PAGE jest ustawiony pionowo.Za pomocą pionowej komory do elektroforezy (zbiornik/komora) cienki żel (zwykle 1,0 mm lub 1,5 mm) wlewa się pomiędzy dwie szklane płytki i montuje w taki sposób, że dolna część żelu jest zanurzona w buforze w jednej komorze, a górna część jest zanurzona w buforze w innej komorze.Po przyłożeniu prądu niewielka ilość buforu migruje przez żel z górnej komory do dolnej komory.Dzięki mocnym zaciskom gwarantującym, że zespół pozostaje w pozycji pionowej, sprzęt umożliwia szybkie przebiegi żelowania z równomiernym chłodzeniem, co skutkuje wyraźnymi pasmami.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produkuje ogniwa do elektroforezy w żelu poliakryloamidowym (zbiorniki/komory) o różnych rozmiarach.Modele DYCZ-20C i DYCZ-20G to kuwety do elektroforezy pionowej (zbiorniki/komory) do analizy sekwencjonowania DNA.Niektóre z ogniw do elektroforezy pionowej (zbiorniki/komory) są kompatybilne z systemem blotting, np. modele DYCZ-24DN, DYCZ-25D i DYCZ-25E są kompatybilne z systemem Western Blotting modele DYCZ-40D, DYCZ-40G i DYCZ-40F, które służą do przenoszenia cząsteczki białka z żelu na membranę.Po elektroforezie SDS-PAGE technika Western Blot jest techniką wykrywania określonego białka w mieszaninie białek.Możesz wybrać te systemy blottingu zgodnie z wymaganiami eksperymentalnymi.
Zasilanie elektroforezy
Aby zapewnić energię elektryczną do działania żelu, potrzebny będzie zasilacz do elektroforezy.W Liuyi Biotechnology oferujemy szeroką gamę zasilaczy do elektroforezy do wszystkich zastosowań.Modele DYY-12 i DYY-12C o wysokim stabilnym napięciu i prądzie mogą spełniać wymagania elektroforezy wysokiego napięcia.Posiada funkcję stojaka, pomiaru czasu, VH i aplikacji krok po kroku.Idealnie nadają się do zastosowania w elektroforezie IEF i sekwencjonowaniu DNA.Do ogólnego zastosowania elektroforezy białek i DNA mamy modele DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 i tak dalej, które są również sprzedawanymi na gorąco zasilaczami z ogniwami do elektroforezy (zbiorniki/komory).Można je stosować w zastosowaniach elektroforezy średniego i niskiego napięcia, na przykład w laboratoriach szkolnych, szpitalnych i tak dalej.Więcej modeli zasilaczy znajdziesz na naszej stronie internetowej.
Marka Liuyi ma ponad 50-letnią historię w Chinach, a firma może dostarczać stabilne i wysokiej jakości produkty na całym świecie.Dzięki wieloletniemu rozwojowi jest godny Twojego wyboru!
Aby uzyskać więcej informacji o nas, prosimy o kontakt e-mailowy[e-mail chroniony] or [e-mail chroniony].
Literatura Czym jest elektroforeza w żelu poliakryloamidowym?
1. Doktor Karen Steward Elektroforeza w żelu poliakryloamidowym, jak to działa, warianty techniki i jej zastosowania
Czas publikacji: 23 maja 2022 r